非洲猪瘟恒温扩增试剂盒（LAMP橙绿变色法）

描述：该制品系专为 RNA 样本的 LAMP 扩增反应设计， 制品中 Bst 4.0+ Polymerase 中包含 Bst 2.0 DNA 聚合 酶、 极其耐热 ThermoStable V 反 转录酶、Rnase Inhibitor，在 RNA 的 LAMP 扩增中无需再加入任何其它 酶制品即可用于 RNA 的 LAMP 扩增。除此外，Bst4.0+ DNA Polymerase 聚合酶中不含有甘油成分，因此可用于 建立 LAMP 引物 mix 与酶制品的冻干品，以提高 LAMP 检测制品的稳定性和易用性。 Bst 4.0+ Polymerase 可搭配不同的反应 Buffer 从而 实现不同的显色与检测方式。三种Buffer均已包含dNTP、 Mg 2+和相应的反应缓冲盐。其中 2xRed LAMP BufferD 用于红黄变色反应，扩增完毕后阳性样品为黄色，阴性样 品为红色；2xSG LAMP BufferD 包含 SYBR Green 染料 用于实时荧光检测；2xLAMP BufferD 用于浊度分析、浊 度仪或搭配 OG 橙绿变色反应管（阳性样本为绿色、阴性 样本为橙黄色，A3821）。 货 号 名 称 A3825 Bst4.0+ Polymerase (250 μl) A3825-01 2xRed LAMP BufferD (1 ml) A3825-02 2xLAMP BufferD (1 ml) A3825-03 2xSG LAMP BufferD (1 ml) 注意：Bst4.0+ Polymerase：2.5μl 该制品包含 8U Bst2.0 DNA Polymerase、20U ThermoStable V反转录酶、8U Rnase Inhibitor、22%海藻糖，不含甘油，可用于冻干。 储存：长期保存于-20℃，可保存 2 年。短期保存置于 4℃， 保存 3 个月，避免反复冻融。 使用方法： 1. 配制反应体系 在 0.2ml EP 反应管中加入下述试剂 2xLAMP BufferD 10 μl Bst4.0+ Polymerase 2.5 μl 10xLAMP Primer Mix 2 μl 模板 RNA X μl ddH2O 到总体积 20 μl 10xLAMP Primer Mix 浓度：FIP/BIP 分别为 16 μM、 LoopF/B 分别为 4 μM、F3/B3 分别为 2 μM 2. 反应体系配好后，置于 60~68°C（首次实验采用 65°C） 进行反应 20~45min。 3. 引物及酶制品的冻干（可参考） Bst4.0+ DNA Polymerase 2.5 μl 10xLAMP Primer 2 µl 45%海藻糖 0.5 μl Total 5 μl 将该制品进行冻干处理，获得冻干品。 4. 冻干制品的 LAMP 扩增 向一份冻干品中加入 10 μl 的 2x Red LAMP BufferD 溶解冻 干制品，并加入最多 10 μl 的检测 RNA 模板(总体积为 20 μL) 进行 LAMP 扩增。 

LAMP是一种新型核酸扩增技术，采用4或6条能够识别目的基因上的6个特异区域的引物，依赖于Bst DNA聚合酶的强链置换活性，在30~60分钟内DNA扩增可达109~1010倍。 LAMP检测方法分为多种，包括染料法、浊度法、电泳法以及我司最新开发的TaqMan荧光探针法。我司推出基于LAMP常用检测方法的冻干LAMP检测通用试剂盒，该系列产品为冻干制品，相对于市面上的液体型产品更加稳定，灵敏度更高，操作更加方便，通常在30min内完成检测。 LAMP变色扩增试剂盒包括：冻干LAMP-HNB变色扩增试剂盒、冻干LAMP橙绿变色扩增试剂盒、冻干LAMP浊度扩增试剂盒和冻干LAMP-TaqMan扩增试剂盒。其中 羟基萘酚蓝（HNB）是一种金属离子指示剂，HNB与镁离子结合使得反应体系初始颜色为紫罗兰色，随着反应的进行，Mg2+与析出的焦磷酸根离子反应生成焦磷酸镁沉淀，羟基萘酚蓝失去了镁离子使得体系颜色变为天蓝色，而未反应的体系则仍保持着紫罗兰色 ；而橙绿变色染料（OG Dye）则可与LAMP扩增产物结合成明显的肉眼可见的荧光绿色，阴性反应则为橙色；浊度法则是由浊度仪检测或肉眼观察LAMP剧烈反应产生的焦磷酸镁沉淀而判断反应结果;而LAMP-TaqMan则是由荧光检测仪器实时分析反应而判读结果。

LAMP方法比较

LAMP TaqMan LAMP-橙绿变色 LAMP-HNB LAMP-浊度 变色现象 荧光探针切割 橙色变绿色 紫罗兰色变天蓝色 无色变白色浑浊 检测设备 定量PCR仪或恒温荧光检测仪 肉眼可见 肉眼可见 肉眼可见或浊度仪 区分度 极易判读 极易判读 可以判读 相对不明显 灵敏度 单Copy 10Copy 10-50Copy 10-100拷贝 特异性 高特异 比较特异 一般 一般 反应温度 60~63℃ 60~65℃ 60~65℃ 60~65℃ 反应时间 15~25min 20~40min 20~40min 20~40min 反应用酶 Bst5.0 Bst4.0 Bst4.0 Bst4.0 综合推荐 ★★★★★ ★★★★★ ★★★ ★★ 试剂开发难度 较易 较难 非常难 较难

储存

所有制品为冻干形式，在未溶解前，该制品可-20℃长期保存，并可室温运输，性能无下降。使用LAMP Buffer溶解后，可立即使用，剩余试剂可在-20℃保存1个月，在-60℃以下长期保存。

实例

以检测非洲猪瘟病毒（ASFV）为例，以标准质粒为模板，分别用橙绿变色、HNB显色和浊度方法检测，结果如下图。

本公司免费为客户设计LAMP引物，需要设计引物者请来信咨询

注意事项

(1). 为了减少交叉污染，请分区操作（试剂和模板DNA的配置操作最好在不同区域中进行）。 (2). 实验时，所需模板量取决与样品类型（0.1 ng~100 ng），可先进行预实验确定模板量。 (3). 各区物品均为专用，不可交叉使用，防止污染。 (4). 实验过程中应穿工作服，带手套，建议使用带滤芯的一次性吸嘴。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！