CCK-8细胞增殖与活性检测试剂盒

产品介绍：

    Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 细胞增殖与活性检测试剂盒的主要成分为水溶性四唑盐WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)，WST-8在电子耦合试剂 1-Methoxy PMS存在的情况下能够被还原成橙黄色水溶性的甲臜 (formazan)。 WST-8被细胞内脱氢酶生物还原后生成的甲臜能够直接溶解在培养基中，生成的甲臜量与活细胞数量成线性相关（图1）。

图1. WST-8 分子结构式及其检测原理

本试剂盒提供了一种灵敏度高、操作简便、使用安全的细胞增殖与活性检测方法。与传统的MTT实验相比具有明显的优势：

1.  MTT实验生成的甲 不是水溶性的，需要使用DMSO等有机溶剂溶解；而本方法产生的甲 是水溶性的，不仅省去了溶解步骤，更因此而减少了该操作步骤带来的误差。

2. 本方法与MTT方法相比线性范围更宽，灵敏度更高。

3. 本方法对细胞无毒性，可以多次测定选取最佳测定时间。

4. 本方法所用试剂在培养基中比MTT更加稳定，实验结果重复性好。

5.  MTT具有毒性，同时其生成的甲 需要有机溶剂溶解，会对操作人员身体造成危害。本试剂无毒，使      用中无需有机溶剂，操作更加安全。

6. 本试剂盒在4℃避光可长期保存，使用无需配制，即开即用。

本试剂盒可以用于生物活性因子的活性检测、抗肿瘤药物的筛选、细胞增殖的检测、细胞毒性实验以及药敏等与细胞活性和增殖相关的实验。

本试剂盒使用方便。试剂盒包含一管已经配制好的含有WST-8的CCK-8溶液，即开即用，无需其它准备步骤。检测过程也无需采用额外的步骤去溶解甲 ，可直接使用96孔板或者384孔板在酶标仪上检测，适合大规模，高通量的样品检测。

本试剂盒可以测定500个样品 (按照每个样品使用10ul计算)。

保存条件：

   CCK-8溶液在避光、0-5℃的条件下可以保存1年，如长期不用可在-20℃下避光保存2年。如需经常使用请将试剂存放在0-5℃。为防止背景值增加，干扰实验结果，请勿反复冻融。

自备材料仪器：

1. 10ul、100ul、200ul等移液器

2. 酶标仪（450nm滤光片）

3. 96孔或其它规格培养板

4. CO2培养箱

使用方法：(以96孔板为例，其它规格培养板请按实际情况安排)

1. 在96孔板中接种细胞悬液 (100 ul /孔 )。将96孔板放在培养箱预培养 (在37℃，5% CO2的条件下)。

2. 向每孔加入10 ul的CCK- 8溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响O.D值的读数)。

3. 将培养板在培养箱内孵育1-4小时（具体时间需要预实验测定）。

4. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光值，如无450nm滤光片，可以使用420-480nm的滤光片。如果样品为高浑浊度的细胞悬液，可以使用600nm以及大于600nm的波长作为参考波长进行双波长测定。

5. 如果需要暂时不测定O.D值，可以向每孔中加入10ul  0.1 M HCl溶液或者1% w/v的SDS溶液，避光保存在室温，24小时内吸光度不会发生变化。

注意事项：

1. 使用96孔板进行检测时，如果细胞培养时间较长，请注意蒸发问题。可选择96孔板外围一圈不计入实验，这些孔可加入培养基、水或PBS，同时可以把96孔板置于靠近培养箱内水盘的位置以缓解蒸发。

2. 培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而不同。在正式实验前，建议先做预实验摸索铺板的细胞数量以及加入CCK- 8试剂后的培养时间 (参考数值：细胞增殖实验每孔 2,000 cells/100ul，细胞毒性实验每孔5,000 cells/100ul)。

3. 铺板时请注意保证每个孔细胞数量均匀，建议铺板过程中注意时常混匀，防止因细胞沉淀造成不均匀。

4. 加 CCK-8溶液时， 速度要快，减少残留，同时请斜贴着孔壁，不要插到培养基液面下，避免产生气泡干扰O.D.数值。加入CCK-8后请前后左右轻轻晃动培养板数次，使培养基和CCK-8溶液充分混匀。

5. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，如果待检测体系中存在还原剂，请通过预实验决定是否需要去除。

6. 加入CCK-8时，如果细胞培养时间较长，培养基颜色已变化或pH值变化，建议换用新鲜的培养基。

7. 本试剂盒系无菌灌装生产。在使用过程中，请在超净台内无菌操作，避免污染。

8. 为了您的健康和安全，请穿着实验服并戴一次性手套或者乳胶手套操作。

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