Phi29 DNA Polymerase

描述：该制品系专为 RNA 样本的 LAMP 扩增反应设计， 制品中 Bst 4.0+ Polymerase 中包含 Bst 2.0 DNA 聚合 酶、 极其耐热 ThermoStable V 反 转录酶、Rnase Inhibitor，在 RNA 的 LAMP 扩增中无需再加入任何其它 酶制品即可用于 RNA 的 LAMP 扩增。除此外，Bst4.0+ DNA Polymerase 聚合酶中不含有甘油成分，因此可用于 建立 LAMP 引物 mix 与酶制品的冻干品，以提高 LAMP 检测制品的稳定性和易用性。 Bst 4.0+ Polymerase 可搭配不同的反应 Buffer 从而 实现不同的显色与检测方式。三种Buffer均已包含dNTP、 Mg 2+和相应的反应缓冲盐。其中 2xRed LAMP BufferD 用于红黄变色反应，扩增完毕后阳性样品为黄色，阴性样 品为红色；2xSG LAMP BufferD 包含 SYBR Green 染料 用于实时荧光检测；2xLAMP BufferD 用于浊度分析、浊 度仪或搭配 OG 橙绿变色反应管（阳性样本为绿色、阴性 样本为橙黄色，A3821）。 货 号 名 称 A3825 Bst4.0+ Polymerase (250 μl) A3825-01 2xRed LAMP BufferD (1 ml) A3825-02 2xLAMP BufferD (1 ml) A3825-03 2xSG LAMP BufferD (1 ml) 注意：Bst4.0+ Polymerase：2.5μl 该制品包含 8U Bst2.0 DNA Polymerase、20U ThermoStable V反转录酶、8U Rnase Inhibitor、22%海藻糖，不含甘油，可用于冻干。 储存：长期保存于-20℃，可保存 2 年。短期保存置于 4℃， 保存 3 个月，避免反复冻融。 使用方法： 1. 配制反应体系 在 0.2ml EP 反应管中加入下述试剂 2xLAMP BufferD 10 μl Bst4.0+ Polymerase 2.5 μl 10xLAMP Primer Mix 2 μl 模板 RNA X μl ddH2O 到总体积 20 μl 10xLAMP Primer Mix 浓度：FIP/BIP 分别为 16 μM、 LoopF/B 分别为 4 μM、F3/B3 分别为 2 μM 2. 反应体系配好后，置于 60~68°C（首次实验采用 65°C） 进行反应 20~45min。 3. 引物及酶制品的冻干（可参考） Bst4.0+ DNA Polymerase 2.5 μl 10xLAMP Primer 2 µl 45%海藻糖 0.5 μl Total 5 μl 将该制品进行冻干处理，获得冻干品。 4. 冻干制品的 LAMP 扩增 向一份冻干品中加入 10 μl 的 2x Red LAMP BufferD 溶解冻 干制品，并加入最多 10 μl 的检测 RNA 模板(总体积为 20 μL) 进行 LAMP 扩增。 

phi29 DNA 聚合酶是从嗜热脂肪芽孢杆菌Bacillus subtilis噬菌体phi29中克隆出的嗜温（30℃）DNA聚合酶，它具有特殊的链置换和连续合成特性，可连续合成长达70kb的DN**段。phi29 2.0 DNA 聚合酶是phi29 DNA聚合酶的改造体，并经多次纯化分离而得。在保留了phi29 DNA聚合酶的链置换、连续合成特性（>70kb）的基础上，提高了滚环扩增的反应温度，phi29 2.0 DNA 聚合酶可以在42℃条件下持续的进行DNA合成（而phi29 DNA 聚合酶在此温度下反应活性很低）。 这种高温的反应特性，具有以下优势：（1）在NGS测序中，其提升了高GC含量、回文结构等复杂模板的延伸能力，使得NGS的覆盖度更均一，降低测序所需深度；（2）高温的反应条件，提升了WGA产物的合成量（2-5倍），并缩短扩增时间（1~2h完成建库扩增）；（3）降低测序中Gap区域，提升单细胞测序的数据质量和完整度；（4）降低非特异性扩增产物；（5）提升MDA/RCA等实验的扩增性能和特异性。 此外，该酶仍然具有很强的3’→5’外切酶校读功能，合成的DN**段保真性高。该酶的外切酶活性较强，因此合成过程中引物需要3’端硫代修饰，以降低外切活性对引物的切割效应。

主要特征

超强链置换能力 连续合成能力 扩增的高保真性

应用

DNA恒温滚环扩增 需强链置换和DNA连续合成的反应 质粒快速复制 高保真快速复制

储存

-20℃可保存3年。

注意事项

1. 1×phi29 Buffer：50 mM Tris-HCl pH 7.5，10 mM MgCl2，10 mM (NH4)2S04，4 mM DTT。必要时可单独额外添加终浓度1 mM DTT和0.2 mg/ml BSA，可提高反应效率。 2. 65℃ 10min即可使该酶失活。 3. 根据实验类型需要，调整dNTP的浓度100~500 μM。 4. 添加Yeast Pyrophosphatase（货号：C5006）可提高DNA产量。 5. 反应引物3’端的硫代修饰可避免引物降解。

实例

用硫代修饰的6N随机引物和两种phi29 DNA聚合酶分别在30°C和42°C对不同量的pUC57质粒进行扩增，结果如下图；由图可见，phi29 2.0 DNA聚合酶在42°C条件下2h即可完成扩增，且产量相对较高。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！