口蹄疫病毒 O、A、Asia-I 型检测试剂盒（实时荧光 PCR 法）说明书

【产品名称】

通用名称：口蹄疫病毒 O、A、Asia-I 型检测试剂盒（实时荧光 PCR 法）

英文名称：Foot and Mouth Disease Virus（O、A、Asia-I）Detection Kit (Triple Channels Real-Time PCR Method)

【包装规格】 25T/盒 & 50T/盒

【预期用途】

本试剂盒利用实时荧光 PCR 原理，定性检测口蹄疫 O、A、Asia-I 型病毒，对口蹄疫 O、A、Asia-I 型病毒引起的偶蹄兽类病的诊断和监控具有重要指导意义。

【检验原理】

本试剂盒针对口蹄疫 O、A、Asia-I 型病毒的高度保守区域设计特异性引物和探针，在反应体系中含口蹄疫 O、A、Asia-I 型病毒基因组模板的情况下，PCR 反应得以进行并释放荧光信号。利用荧光定量 PCR 仪对 PCR 过程中相应通道信号进行实时监测和输出，实现检测结果的定性分析。

【主要组成成份】

注：阴性对照为偶蹄兽类基因组 DNA，阳性对照为失去活性的口蹄疫 O、A、Asia-I 型病毒 cDNA。

【储存条件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反复冻融，有效期 12 个月。

【适用仪器】ABI 系列、Bio-Rad 系列、Agilent Stratagene MX 系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene 系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR 仪。

【样本要求】

1. 新鲜采集的咽拭子、疱疹液和粪便标本，并使用灭菌生理盐水悬浮。

2. 应避免标本间交叉污染。

3. 标本收集后可立即检测；若不能立即检测，可置于 2～8℃冷藏过夜保存；如需长期保存，标本应冻存于-80℃以下，避免反复冻融。

【检验方法】

1. 试剂准备（试剂准备区）

（1） 从冰箱中取出试剂盒, 从试剂盒中取出实验所需试剂，充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体。

（2） 核算当次实验所需要的反应数（n），并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。

n =阴性对照数（1T）+阳性对照数（1T）+误差预留量（1T）+样本数

(3)在无菌离心管中加入上述试剂，充分混匀后瞬时离心。按照 20 μL/管分装量将试剂分装至 PCR 反应管。

2. 样本准备（样本处理区）

用 QIAGEN、Roche 公司 RNA 提取试剂盒提取 RNA，具体操作按照其试剂盒说明书操作。

3. 加样

在上述制备好的 PCR 反应样本管中分别加入处理好的待测标本 RNA 各 5 μl、终体积 25 μl/管，盖好 PCR 反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到PCR 仪器上。阴性对照和阳性对照管则各加 5 μL 试剂盒自带的阴性对照或阳性对照品，终体积为 25 μl/管，盖好 PCR 反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到 PCR 仪器上。

4. PCR（PCR 扩增区）

（1） 取样本处理区准备好的 PCR 反应管，放置在实时荧光定量 PCR 仪样品槽相应位置，并记录放置顺序。

（2） 按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行