辛德毕斯病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒使用支原体污染PCR检测试剂盒，能在2到3小时内获得可靠的结果，是一种灵敏度高、特异性强、快速的检测支原体污染的方法，具有以下特点： ①特异性引物是针对高度保守的支原体16S rRNA序列设计的，可用于检测非常广泛的支原体种类，不受真核细胞或细菌DNA干扰。经本试剂盒测试的支原体菌株涵盖了所有常见的支原体污染种类； ②灵敏度极高，最低仅需10个拷贝的支原体基因组即可使检测呈阳性； ③阳性对照所用引物与支原体检测相同，可帮助判断假阴性现象，避免假阴性导致的误判； ④包含PCR反应所需的所有成分，只需进行一次PCR反应，使用方便。

辛德毕斯病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 6 个月。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1、用自选方法抽提病毒样品 DNA。注意：可以选用本公司的一管式病毒 DNAout 戒柱

式病毒 DNAout 产品。

二、PCR（60 uL 体系）

1、样品管：在 PCR 管中加入下列成分：

辛德毕斯病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒成分 加入量

PCR MagicMix 2.0 30 uL

待检测样品 DNA(自备) X

ASFV 专一性引物一 2 uL

ASFV 专一性引物二 2 uL

补水到 60 uL

三、PCR 反应参数：

过程 温度 时间

预变性 94℃ 5 min

PCR 反应

（35 个循环）

94℃ 1 min

50℃ 1 min

72℃ 1 min

最后延伸 72℃ 10 min

保存条件：保存于-20℃，避免反复冻融。没有反复冻融的情况下，保质期一年。

辛德毕斯病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒操作步骤：

1：样品准备：取1毫升细胞培养上清（贴壁和悬浮细胞都可以,最好已培养48小时以上），在16000g离心5分钟，小心弃去上清，避免丢失沉淀（沉淀量有可能很少，目视看不到）。将沉淀用无菌PBS重悬，在16000g离心5分钟，同样小心弃去上清，如此反复用无菌PBS洗三次。最后将获得的沉淀用100微升超纯水重悬，置于100℃水浴中孵育5分钟。如此制备好的样品可在4℃保存1到2个月。

2：PCR反应的准备：

待各组份融化后先瞬时离心，然后轻弹混匀。按下表在已灭菌的PCR管中配制反应体系，每次实验需加一个阴性和一个阳性对照，测试反应管可以有多个。配制过程中应注意无菌，戴口罩，并注意避免操作产生的气溶胶造成样品间的交叉污染，推荐在有风压的设备如超净台或生物安全柜中进行操作。建议配制完毕后瞬时离心以使液体沉至管底。