T4 DNA 连接酶

描述：T4 DNA Ligase 可催化相邻 DNA 链的 5’-P 末端和 3’-OH 末端以磷酸二酯键结合的反应，需 ATP 作辅酶，不仅 可以催化粘性末端之间或平滑末端之间的 DNA 的连接，也 可以催化 DNA 与 RNA 之间以及少数 RNA 之间的连接。可 应用于在粘性末端或平末端连接双链 DNA 分子，也可应用 于修补双链 DNA、RNA 或 DNA RNA 杂交体上的缺口。 组分 名称 35,000U 3,500kU T4 DNA Ligase(350 U/μl) 100 μl 10 ml 10× Ligation Buffer 250 μl 20 ml 活性定义：在 20 μl 连接反应体系、0.12 μM（300μg/ml） 的 5’-末端浓度条件下，16°C 反应 30 分钟，能使 50％HindIII 消化的 λDNA 片段连接所需的酶量定义为一个活性单位。 应用：PCR 扩增、3’端加尾、DNA 测序。 储存：-20°C 可保存 2 年。 操作方法 1. 按以下组分配制反应体系 10×Ligation Buffer 2 μl 载体 50 ng 插入片段 50-150 ng T4 DNA Ligase 1-2 μl ddH2O Up to 20 μl 2. 如为粘末端连接反应，16°C 连接 3 小时，或 4°C 连接过 夜；连接产物直接用于转化（或冻存于-20°C）。

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