产品内容：
提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体40mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存，临用前加入2.8mL双蒸水充分溶解备用；
试剂三：液体×1支，-20℃保存，临用前加入260μL双蒸水充分溶解备用；
试剂四：液体×1支，4℃保存，临用前加入260uL双蒸水充分溶解备用；
PFK工作液（可测25个样）的配制：取19mL试剂一和1.26mL试剂二充分混匀。
产品说明：
    PFK（EC 2.7.1.11）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，负责将果糖-6-磷酸和ATP转化为果糖二磷酸和ADP，是糖酵解过程的关键调节酶之一。
    PFK催化果糖-6-磷酸和ATP生成果糖二磷酸和ADP，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH氧化生成NAD+，在340nm下测定NADH下降速率，即可反映PFK活性。
需自备的仪器和用品：
    紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本的前处理
1、细菌、细胞或组织样品的制备
细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织处理：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
二、测定步骤和加样表
试剂名称（μL）
测定管
PFK工作液
800
样本
30
试剂三
5
试剂四
5
将上述试剂按顺序加入1 mL石英比色皿中，加样本的同时开始计时；在340 nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1，比色后迅速将比色皿连同反应液一起放入37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴中，准确反应10分钟；迅速取出比色皿并擦干，340 nm下比色，记录10分20秒时的吸光度A2，计算ΔA=A1-A2。
注意事项
1、测定过程中试剂三、试剂四和样本在冰上放置，以免变性和失活。
2、比色皿中反应液的温度必须保持37℃或25℃，取小烧杯一只装入一定量的37℃或25℃蒸馏水，将此烧杯放入37℃或25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。
3、最好两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。
4、若ΔA大于0.5，需将酶液用酶提取液稀释，使ΔA小于0.5，可提高检测灵敏度。
三、PFK活力单位的计算：
1、 血清（浆）PFK活力的计算: 
单位的定义：每毫升血清（浆）在反应体系中每分钟催化1nmol果糖-6-磷酸和1nmolATP转化为1nmol果糖-1,6-二磷酸和1nmol ADP定义为一个酶活力单位。
PFK（U/mL）=[△A×V反总÷（ε×d）×109] ÷V样÷T=447.5×△A
2、 组织、细菌或细胞中PFK活力的计算: 
（1） 按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化1nmol果糖-6-磷酸和1nmolATP转化为1nmol果糖-1,6-二磷酸和1nmol ADP定义为一个酶活力单位。
PFK（U/mg prot）＝[△A×V反总÷（ε×d）×109] ÷(Cpr×V样)÷T=447.5×△A ÷Cpr
（2） 按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化1nmol果糖-6-磷酸和1nmolATP转化为1nmol果糖-1,6-二磷酸和1nmol ADP定义为一个酶活力单位。
PFK（U/g 鲜重）＝[△A×V反总÷（ε×d）×109] ÷(W×V样÷V样总)÷T=447×△A ÷W
（3） 按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化1nmol果糖-6-磷酸和1nmolATP转化为1nmol果糖-1,6-二磷酸和1nmol ADP定义为一个酶活力单位。
PFK（U/104 cell）＝[△A×V反总÷（ε×d）×109] ÷(500×V样÷V样总)÷T=0.895×△A
V反总：反应体系总体积，0.835×10-3L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光径，1 cm；V样：加入样本体积，0.03mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，10min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。