机体多种细胞均可分泌非活性状态的TGF-beta。在体外,非活性状态的TGF-beta又称为latency associated peptide (LAP),通过酸处理可被活化。联科生物TGF-beta ELISA试剂盒,样本如何活化呢,以下步骤供参考(标准品已经是活化好的,无需活化):
如 Human TGF-beta1 血清、血浆样本活化步骤:
1、加样:涡旋振荡混匀样本,血清、血浆取40uL样本加入1.5Ml EP 管中。细胞上清样本/尿液样本 所需样本体积,请看说明书。
2、加酸活化:加20Ul 1N Hcl 混合均匀,室温孵育酸化10分钟。
3、加碱中和:加20Ul 1N NaOH 终止酸化。
样本活化结束。
由于血清中TGF-beta1含量较高,活化后血清样本需经20倍预稀释。细胞培养上清/尿液必须在活化后立即检测分析。
另请注意:细胞培养基中的动物血清可能含有高浓度的潜隐 TGF-β1。为了获得最好的实验结果,在 TGF-β1 测定试验中使用不含动物血清的细胞培养基。如果使用了含有动物血清的细胞培养基,应该设立适当的对照,确定 TGF-β1 的基准浓度。