BeyoRT™ III M-MLV反转录酶 产品简介-自主发布-资讯-生物在线

BeyoRT™ III M-MLV反转录酶 产品简介

作者:北京百奥创新科技有限公司 2023-02-20T17:27 (访问量:5450)

BeyoRT™ III M-MLV反转录酶,即BeyoRT™ III M-MLV reverse transcriptase,是一种经过改造和优化的快速高效(短至10min完成反转录)、热稳定(高达55℃)、高精确度、产物超长(长达12kb)的反转录酶,具有正常的依赖于RNA或DNA模板的DNA聚合酶活性,能够以RNA或DNA为模板,在引物存在的情况下进行互补DNA链的合成,即可以进行cDNA(complementary DNA)的第一链合成。同时本反转录酶保留了RNase H活性,能选择性剪切RNA和DNA杂合双链中的RNA,有利于后续cDNA第二链的合成。
本产品是最常用的优质反转录酶之一,广泛用于获得总RNA或mRNA后cDNA第一条链的合成,后续可以用于PCR、real-time PCR也称定量PCR(quantitative PCR, qPCR)、cDNA的第二链合成以及cDNA文库的构建,尤其是逆转录所得目的基因的克隆等。BeyoRT™ III M-MLV反转录酶还可以通过反转录用于DNA探针的荧光、生物素、地高辛或同位素标记等,也可以通过引物延伸(primer extension)来分析和研究RNA。
M-MLV (Moloney Murine Leukemia Virus),也称MMLV或M-MuLV;反转录酶(reverse transcriptase)也称逆转录酶或RT酶。
本产品反转录快速高效,普通反转录仅需10min。实测小于3kb的片段,42℃反转录10min即可完成,与反转录60min相比无显著差别。大于3kb的片段,特别是大于6kb的片段,推荐反转录60min,以获得最佳的反转录效果。
本产品反转录产物长度超长。本产品经测试可以轻松完成长度为8 kb以下基因的反转录(参考图1),反转录的最大长度可以达到12 kb。

图1. 使用BeyoRT™ III M-MLV反转录酶反转录总RNA后,对于不同长度的cDNA进行PCR扩增后的电泳效果图。图中可见0.2-12kb的cDNA可以非常高效地被反转录。

本产品热稳定性好,反转录效率高。本产品最适反应温度为42℃,当温度达到50℃时仍具有很高活性,对于长度较短的cDNA反转录,温度达到55℃时也可获得较高产量的cDNA。高温反转录对于高GC含量RNA的反转录,能有效减少二级结构,提升反转录效率。本产品反转录速度快,6kb以下的cDNA反转录只需0.5h即可完成,3kb以下的cDNA反转录10min即可完成(参考图2)。

图2. BeyoRT™ III M-MLV反转录酶在不同温度反应不同时间的反转录效果。从HEK293T细胞抽提获得的总RNA 2μg,在20μl反转录体系中按照图中所示温度、时间进行反转录。反转录后取1μl反转录产物进行目的基因(2.6kb的YWHAZ基因和6.0kb的ADAR1基因)的PCR扩增和电泳。

本产品性价比高。BeyoRT™ III M-MLV反转录酶是一种大肠杆菌重组高表达的反转录酶,由于其表达量非常高,大大提高了本产品的性价比。本反转录酶为表达含有从Moloney Murine Leukemia Virus reverse transcriptase基因克隆的pol基因,并进行了多个突变优化以提高其热稳定性、反转录效率、反转录长度和表达量。
酶活性定义:One unit of the enzyme incorporates 1 nmol of dTTP into acid-precipitable material in 10 min at 37℃ using poly(A)•oligo(dT)12-18 as template-primer。反应体系为 50 mM Tris-HCl(pH 8.3), 75 mM KCl, 3 mM MgCl2, 10 mM DTT, 0.5mM [3H]-dTTP and 0.4 mM polyA•oligo(dT)12-18
纯度:不含DNA内切酶、外切酶和***酶和RNA酶,可以满足常规反转录合成cDNA第一条链等的需要。
酶储存溶液:20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.01%(v/v)
NP-40 and 50%(v/v) glycerol。
失活或抑制:80℃孵育10分钟可以导致BeyoRT™ III M-MLV反转录酶失活;EDTA、EGTA等螯合剂、无机磷酸盐或焦磷酸盐以及聚氨(polyamine)对BeyoRT™ III M-MLV反转录酶有抑制作用。
本产品中M-MLV反转录酶的浓度为200U/μl,用于体积为20μl的反转录体系时,本试剂盒的不同包装足够分别进行50次、250次和1000次反转录反应。
包装清单:

产品编号产品名称包装
D7176S-1BeyoRT™ III M-MLV反转录酶50μl
D7176S-2Reaction Buffer (5X)0.3ml
说明书1份

保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
对于GC含量比较高的RNA的反转录,产品的使用说明中给予了特别说明,请予以关注。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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