ELISA(酶联免疫吸附剂测定)是一种快速、灵敏、准确可靠的一种定量分析方法,样本的处理对于ELISA实验的成功有着举足轻重的作用。 利用ELISA进行检测的样本类型包括常见的血液(血清、血浆),组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清以及不常见的皮肤组织、尿液、粪便、肺泡灌洗液、唾液、脑脊液、胸腹水、前列腺液、精液、阴道分泌物等,这些样本收集的时间、处理方法和保存都会影响到ELISA实验的结果。下面就常见ELISA血液样本处理方法的整理,希望对您有所帮助。
血液采取后应尽快进行处理,使血清(浆)从与血细胞接触的全血中分离出来。
血清与血浆的区别:
血清是血液凝固后缺少纤维蛋原的血浆,故血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外,其他成份均等同于血清。
选择血清还是血浆样本?
由于血清中缺乏很多的凝血因子,但有一些凝血产物,如果是测凝血因子建议选择血浆样本;同时血浆中有纤维蛋白原,如果纤维蛋白原对待检测指标有影响,建议选择血清样本。大多数情况下二者均可以选择。
处理方法:
♦ 血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2 小时或 4 度过夜,然后 1000×g 离心 20分钟,取上清即可。这是一个让血液自然凝固的过程,温度温度越低,凝集越缓慢,可根据需要添加促凝剂。
♦ 血浆:血浆样本需要抗凝,一般建议用 2.0%EDTA,1%肝素,3.8%枸橼酸钠作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30 分钟内于2 ~8度 1000 g 离心15 分钟,取上清即可检测。根据待检测目标物的性质不同选取不同的抗凝剂。
处理样本的过程就是收集目标蛋白的过程,由于蛋白容易变性,降解,故该过程应尽量温和。样本处理之后的储存也非常重要,尤其注意不要反复冻融,样本处理之后可分装密封保存, 4 度保存应小于 1 周,-20 度不应超过 1 个月,-80度不应超过2个月。在标本使用前应缓慢均衡至室温,不应加热使之融解。样本的处理是实验成功的第一步, ,以上就是关于常见样本处理方法的一个简述,供研究者参考。
联科提醒:
如果您选择的
抗凝剂是 |
请注意
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枸橼酸钠
(柠檬酸钠) |
Ca2+有凝血作用,枸橼酸钠能与血液中的钙离子形成可溶性的螯合物,从而阻止血液凝固。配成109mmol/L 的浓度和血液1:9,106mmol/L 的浓度和血液 1:4。
缺点:血液中溶解度低,抗凝作用较弱。 优点:对凝血因子有很好的保护作用,大部分凝血试验都可用枸橼酸钠抗凝。 |
乙二胺四乙酸(EDTA)盐
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与血液中的钙离子结合形成配位化合物,从而阻止血液凝固。15g/L EDTA和血液 1:10。
优点:对红细胞和白细胞形态影响小。 缺点:影响血小板的聚集。不适用于凝血实验和血小板功能相关实验的检测。 |
肝素
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通过与抗凝血酶Ⅲ结合,增强抗凝血酶的作用,灭活丝氨酸蛋白酶,从而可阻止凝血酶的形成和阻止血小板聚集,阻止血液凝固。肝素钠 1g/L与血液 1:10。
优点:抗凝能力强、不影响血细胞体积、不易溶血、能耐高温。 缺点:引起白细胞聚集。肝素抗凝血应于短时间内使用,否则放置过久血液又可凝固。 |