HUVEC细胞的背景：

人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) 是从脐带静脉内壁分离出来的原代细胞。内皮细胞常用于研究低氧、炎症、氧化应激、感染反应及正常和肿瘤相关血管生成等应用。


血管形成实验:

体外血管形成实验能够很好的模拟肿瘤血管发生过程，并且适合研究某些基因或药物对这一过程的影响。血管内皮细胞（HUVEC）在基质胶（Matrigel）上保留了内皮细胞增殖分裂快、迁移速度快的特点，用成管的方法可以快速参与血管的基因和信号通路等。

HUVEC细胞形态：



问题1
成功的血管形成需要具备的条件有哪些？
                                                                                                     中乔科研小助手解答


1.huvec细胞：原代的huvec传代次数有限，建议在2-8代内进行实验。

2.试剂的选择：内皮细胞专用培养基、DMEM、FBS、基质胶、96孔板或24孔板。

3.基质胶的准备：

A.提前24h将基质胶放入4度冰箱过夜、进行解冻备用。

B.第二天将24孔板放在冰盒上，将基质胶用DMEM基础培养基1:1进行稀释一倍后离心，使基质胶跟培养基混匀，24孔板里加入基质胶100ul每孔，建议做重复孔；加基质胶一定垂直滴入孔底部，减少气泡产生，使用震荡的方法让胶均匀分布。

C.放入孵箱30-60分钟让其形成凝胶，凝胶是半固体，在加入细胞前是否凝固直接关系到实验的成败。

4.实验步骤：

A.huvec细胞细达到80%汇合度后准备消化，一般过夜培养后的细胞状态更佳，收集细胞进行计数，并按照需求梯度稀释调整细胞的浓度，请一定保证细胞状态完好。

B.24孔板加入200ul的huvec细胞悬液，浓度约为12-20万个细胞,建议做复孔；
细胞加入后不应该移动培养板，放入37度孵箱约4小时左右即可进行观察血管是否形成。

C.一般在15小时后成管会开始缓慢皱缩凋亡。

D.结果分析、图片采集。根据需求可用固定后进行荧光染色。



成功的血管形成图：

                                           

Huvec成管后分析
imagej软件分析步骤

FIle-open-打开图片-找到angiogenesis analyze插件即可。软件会自动变成如下的图形。请点击箭头所指的网格状图标;

点击网状图标后点击analyze HUVEC phase contrast选项后经过约几分钟时间即可生产如下图一样的图片；

File-Save as 即可将图片进行保存；

结果包括nodes节点。junctions交叉点。meshes网眼数还有网眼的面积。branches血管分支数; length总长度、 branching length分支长度、segments length主干的长度。

                                                                 



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中乔新舟原代huvec简介

1.我司提供HUVEC于P1代冻存，每管含有细胞数量>5X105cells/ml；
2.经测试HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母菌、真菌，检测均为阴性；
3.细胞来源正规，可溯源，可提供细胞流式及免疫荧光鉴定,可提供伦理报告；
                     
                                                                    荧光抗体vWF和CD31标记

4.HUVEC细胞专用培养基: 基础培养基+5%胎牛血清+1%内皮细胞生长因子+1%青链霉素。

                                                                       内皮细胞专用培养基
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5.HUVEC细胞包被液： HUVEC复苏前建议使用重组人纤连蛋白进行包被，辅助HUVEC的粘附和细胞质扩散。同时纤维粘连蛋白也适用于不能自身合成生物基质的细胞培养或在无血清培养基中培养的细胞。重组人纤连蛋白含有缓冲盐。

                                                                         重组人纤连蛋白
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6.HUVEC细胞的冻存：我司HUVEC细胞至少保证15次倍增，实验过程中可进行冻存保种方便下次实验使用。我司使用无血清冻存液，该冻存液含 DMSO、 葡萄糖等各种细胞营养成分，提高细胞存活率和活力，亦适合于无血清培养细胞和蛋白表达细胞。不含动物来源性蛋白， 不含血清，可减少各类细菌、病毒和支原体等污染，保证冻存细胞的安全。 通用于各种动物细胞株（肿瘤细胞和常规细胞）， 冻存细胞可在-80℃长期保存（>5 年）。

                                                                         无血清细胞冻存液
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